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當(dāng)前位置:首頁(yè)技術(shù)文章腫瘤組織的原代細(xì)胞培養(yǎng)有哪些注意事項(xiàng)?

腫瘤組織的原代細(xì)胞培養(yǎng)有哪些注意事項(xiàng)?

更新時(shí)間:2024-04-08點(diǎn)擊次數(shù):1260

原代培養(yǎng)是直接從生物體組織或器官的一部分進(jìn)行培養(yǎng),也稱(chēng)初代培養(yǎng)。腫瘤組織的原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)為腫瘤研究及治療提供充足的細(xì)胞來(lái)源是癌癥在體外研究的重要工具,與體內(nèi)研究相輔相成。但目前腫瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)成功率不高的許多問(wèn)題還需繼續(xù)探討與研究。腫瘤組織的原代細(xì)胞培養(yǎng)有哪些注意事項(xiàng)?讓我們一起來(lái)看看吧!


注意點(diǎn)一:取材部位的選擇非常重要,應(yīng)在癌細(xì)胞集中、細(xì)胞活力較好的部位取材,盡量避免在壞死區(qū)取材;

注意點(diǎn)二:取材后應(yīng)盡快培養(yǎng),最好不要超過(guò)24h,如需耽擱時(shí)間,可將組織塊于培養(yǎng)液中浸泡,放置于冰浴或4℃冰箱;

注意點(diǎn)三:癌組織周?chē)难骸⒅镜日5慕M織應(yīng)去除,可以保證癌細(xì)胞的純度;

注意點(diǎn)四:取材方法:獲取的組織塊最好能有指尖大小,太小了可能養(yǎng)不起來(lái),因?yàn)榧?xì)胞有生物學(xué)環(huán)境,細(xì)胞多了長(zhǎng)得也會(huì)快,如果細(xì)胞密度太低了,細(xì)胞很難長(zhǎng)起來(lái),可能的原因是細(xì)胞分泌的生長(zhǎng)因子。

注意點(diǎn)五:切碎癌組織時(shí),可用眼科剪,也可用小刀,避免用大剪刀,所用刀剪要鋒利,以免挫傷細(xì)胞。

注意點(diǎn)六:分散細(xì)胞的方法:機(jī)械和藥物兩種方法。癌組織不同與正常組織,單純用機(jī)械的剪碎辦法,癌細(xì)胞就可以游離出來(lái),成為細(xì)胞懸液。常用胰蛋白酶、EDTA消化分離。如果從含有大量堅(jiān)硬的結(jié)締組織分離癌細(xì)胞,膠原纖維不能被胰蛋白酶和EDTA消化,則使用膠原蛋白酶消化,如:原代黑色素瘤細(xì)胞,黑色素瘤一般長(zhǎng)在肢端,肢端的角質(zhì)層太厚,就需要膠原蛋白酶消化。

注意點(diǎn)七:接種數(shù)量要足夠,造成培養(yǎng)細(xì)胞所必須的生物學(xué)環(huán)境;

注意點(diǎn)八:更換培養(yǎng)液的時(shí)可換半量或1/4量,將pH維持在7.2-7.4;

注意點(diǎn)九:新配試劑要做無(wú)菌實(shí)驗(yàn),嚴(yán)格無(wú)菌操作,防止污染,新手建議不要直接養(yǎng)原代,先拿實(shí)驗(yàn)室的腫瘤細(xì)胞養(yǎng)養(yǎng)練練手;

注意點(diǎn)十:若組織在消化時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)仍未散開(kāi),可采用多次提取消化法以減少酶對(duì)已消化下來(lái)的細(xì)胞的損傷;

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